師兄純化蛋白的不二法門，竟是在實(shí)驗(yàn)室修「無情道」？

第一章

師兄手中的移液器正上下翻飛，他需要從混沌懸液中提取項(xiàng)目的命根子——目標(biāo)蛋白。師兄素有蛋白純化神來之手的美譽(yù)，總被有心之人覬覦：

假笑師妹

師兄，你的這批樣品我也想用，幫我提個(gè)蛋白唄？

-話音未落，蹭料師姐的手已伸到眼前-

洗滌緩沖液江湖救急，借我使使！

蹭料師姐

-急性子博后直接將他的粗提液懟了過來-

急性子博后

兄臺(tái)，先幫我提一個(gè)試試，你的樣品先放冰箱！

第二章

「三面夾擊」下，師兄嘴角微揚(yáng)，手中的移液器劃出一道優(yōu)雅的弧線，祭出破局之法：

師兄

「選擇性耳背」——對(duì)周遭的無禮請求自動(dòng)屏蔽，眼中只有離心管中那片微觀宇宙。

師兄

「鐵手結(jié)界」——起身護(hù)住關(guān)鍵試劑，口中輕念護(hù)身咒語：「退！退！退！」，手上步驟卻行云流水，絲毫不亂。

第三章

師兄已優(yōu)雅地將澄澈的純蛋白液收入管中，雜蛋白在廢液缸里發(fā)出無聲哀嚎，他轉(zhuǎn)向我，眉梢一挑：

師兄

要點(diǎn)可都記下了？

-我自信滿滿-

蛋白純化的核心就是學(xué)會(huì)拒絕，保持專注。

-師兄一個(gè)趔趄，差點(diǎn)摔了樣本-

師兄

秘訣是讓你用親和純化磁珠法純化！它的簡便和高效，才是真法寶?。?/p>

與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)純化方法相比，親和純化磁珠作為一種高效、便捷的工具，正在逐漸成為實(shí)驗(yàn)室的首選。如果您正在進(jìn)行蛋白純化實(shí)驗(yàn)，或者有蛋白純化需求，即日起至 2025 年 10 月 28 日，可識(shí)別下方二維碼，花 2 分鐘參與純化磁珠有獎(jiǎng)問卷填寫，有機(jī)會(huì)獲得文件袋或定制筆記本！

師兄小課堂

親和磁珠純化具有以下優(yōu)勢顯著的優(yōu)勢

操作簡便：磁珠的磁性特性使得分離與回收過程變得簡單高效，減少了實(shí)驗(yàn)操作的復(fù)雜性和時(shí)間消耗。

可擴(kuò)展性：無論是小規(guī)模實(shí)驗(yàn)還是高通量篩選，親和純化磁珠都能輕松應(yīng)對(duì)，滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。

兼容性強(qiáng)：適用于多種樣本類型，包括細(xì)胞裂解液、血清和組織提取液，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、藥物開發(fā)和臨床診斷等領(lǐng)域。

親和純化磁珠法純化蛋白有五個(gè)關(guān)鍵要點(diǎn)

充分重懸：磁珠靜置后會(huì)沉降，取用前必須通過渦旋使其成為均勻的懸液。

溫和混勻：在整個(gè)結(jié)合和洗滌過程中，要通過輕柔的翻轉(zhuǎn)或吹打來混勻磁珠與液體。避免使用渦旋損傷蛋白或磁珠。

完全分離：將管子置于磁力架上后，務(wù)必靜置等待溶液完全變清澈，確保所有磁珠都被磁性吸附到位后。

小心移液：分離后，使用移液器小心地吸棄上清液，槍頭應(yīng)遠(yuǎn)離聚集的磁珠。切勿采用傾倒的方式。

保持濕潤：在整個(gè)操作過程中，絕對(duì)不能讓磁珠干燥。一旦磁珠變干，會(huì)極大地增加非特異性吸附。

通過使用親和純化磁珠，研究人員能夠更快速地獲取高純度的蛋白質(zhì)，為后續(xù)的功能研究和應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。默克的蛋白純化磁珠服務(wù)是一套為現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的「精煉」工具，它通過將分離步驟極致簡化，極大地提升了蛋白純化的效率與體驗(yàn)，特別適合在高通量、自動(dòng)化、快速驗(yàn)證的場景下替代傳統(tǒng)方法。

Anti-FLAG? M2 磁珠：高效的 FLAG? 標(biāo)簽蛋白純化和 IP 方案

Anti-FLAG? M2 抗體可識(shí)別融合蛋白 N 端、Met-N 端或 C 端的 FLAG? 八肽序列（N-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-C），ANTI-FLAG? M2 親和磁珠（貨號(hào)：M8823）是結(jié)合 ANTI-FLAG? M2 小鼠單抗、平均直徑為 50 μm 的超順磁鐵包覆的 4% 瓊脂糖微珠，提供一種簡單、便捷的方法，用于從哺乳動(dòng)物、細(xì)菌和植物提取物中對(duì) FLAG? 標(biāo)簽融合蛋白進(jìn)行蛋白純化、免疫沉淀和蛋白互作研究。

特點(diǎn)和優(yōu)勢：

高特異性：純化得到的蛋白純度高，通常無需進(jìn)一步純化

高效便捷：磁性特性允許快速從懸浮液中分離磁珠，結(jié)合磁力平臺(tái)輕松實(shí)現(xiàn)高通量操作

高可重現(xiàn)：簡化的操作流程，避免樣品損失，結(jié)果更可控，目的蛋白定量更精確

應(yīng)用舉例：

高效捕獲 FLAG? 標(biāo)簽蛋白：磁力架輔助和洗脫方法優(yōu)化

ANTI-FLAG? M2 親和磁珠識(shí)別并捕獲 FLAG? 肽融合蛋白，結(jié)合磁力架即可高效實(shí)現(xiàn)小規(guī)模的 FLAG 標(biāo)簽蛋白純化和 IP 操作。

Anti-FLAG? M2 磁珠結(jié)合的融合蛋白可通過多種方法洗脫，包括肽競爭法、酸性法和 SDS-PAGE 上樣緩沖液法。

本文對(duì)三種洗脫方法進(jìn)行了比較。結(jié)果表明：

1

3X FLAG? 肽競爭和酸性（pH 2.5～3.0）洗脫法對(duì) Anti-FLAG? M2 磁珠的洗脫最為高效。這類磁珠不適合堿性洗脫（pH 8～10）

2

用 3X FLAG? 肽洗脫時(shí)，樣品需與 100～150 ng/μL FLAG 肽共同孵育 30 分鐘，酸性洗脫時(shí)，與 0.1 M 甘氨酸-鹽酸（pH 2.5～3.0）的孵育時(shí)間則不到 10 分鐘，延長甘氨酸-鹽酸的洗脫時(shí)間并不能增加蛋白洗脫量。

3

使用 SDS-PAGE 上樣緩沖液洗脫的條件較為簡單，但由于上樣緩沖液中的 SDS 造成 M2 抗體變性，凝膠電泳出現(xiàn)了對(duì)應(yīng) anti-FLAG? 抗體重鏈和輕鏈的條帶。

使用三種洗脫方法的小規(guī)模 anti-FLAG? M2 磁珠免疫沉淀實(shí)驗(yàn)方案

比較 ANTI-FLAG? M2 磁珠免疫沉淀的三種洗脫方法。St = 起始材料；3X = 3X FLAG? 肽，pH = 2.5 甘氨酸

比較甘氨酸孵育 5 至 30 分鐘范圍的洗脫組分。左圖：考馬斯亮藍(lán)染色凝膠。右圖：ANTI-FLAG? M2 抗體的免疫印跡。

PureProteome? 磁珠：高通量蛋白純化和 IP 方案

默克提供全面、質(zhì)量卓越的純化磁珠產(chǎn)品，提供高效的蛋白純化方案，助力自動(dòng)化純化方案。其中，PureProteome?系列磁珠將蛋白/標(biāo)簽試劑共價(jià)偶聯(lián)到順磁性親和介質(zhì)（ 即磁珠） 上，進(jìn)一步增強(qiáng)了純化介質(zhì)的應(yīng)用性。PureProteome? 磁珠包括 Protein A/G 混合磁珠、抗體亞型純化磁珠、鎳磁珠等，是抗體/蛋白純化、血清耗竭、IP、Co-IP 等應(yīng)用的高效方案。

特點(diǎn)優(yōu)勢：

高結(jié)合能力：增加的表面積使結(jié)合能力是同類磁珠的 6 倍以上

高特異性：非特異性吸附低，極大地降低了背景，獲得高純度蛋白、抗體

結(jié)果一致：簡化的操作流程，完全去除緩沖液且無樣品損失，更可控

快速高效：增強(qiáng)的結(jié)合平衡將孵育時(shí)間減少超過 50%

應(yīng)用舉例：

HIS TAG? 蛋白自動(dòng)化純化 - PureProteome? 鎳磁珠 & AAW? 平臺(tái)

HIS 標(biāo)簽（組氨酸標(biāo)簽）是生物分子純化中最常用的標(biāo)簽之一，由于其簡便性和高特異性，HIS 標(biāo)簽不僅提高了純化效率，還減少了后續(xù)處理的復(fù)雜性。然而，在分析數(shù)百個(gè)新生成的突變體時(shí)，篩選重組標(biāo)簽蛋白的表達(dá)也是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。

我們經(jīng)過驗(yàn)證的自動(dòng)化方案在 2.5 小時(shí)內(nèi)使用鎳-HIS 結(jié)合磁珠對(duì) 96 孔的細(xì)胞漿進(jìn)行純化，最終得到的 96 孔分離蛋白可以通過多種方法進(jìn)一步分析，包括毛細(xì)管電泳（CE）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）或其他高通量檢測。

PureProteome? 鎳磁珠是自動(dòng)化純化的理想選擇，因?yàn)槠湎鄬?duì)較高的結(jié)合能力（1～5 μg 蛋白/mL 珠懸液）和耐用的珠類型（硅珠）。將這些珠與裂解溶液如 CelLytic? B 試劑或 BugBuster? 主混合物結(jié)合，可以創(chuàng)建高效的裂解和捕獲方法，非常適合由 Opentrons? 驅(qū)動(dòng)的 AAW? 系統(tǒng)。

PureProteome? 用戶指南方案已被編為 Python 代碼，經(jīng)過測試并通過 Millipore? 應(yīng)用庫提供下載。一旦下載到儀器上，它可以用于執(zhí)行所有液體處理步驟，包括一步裂解和捕獲、三次洗滌和兩次洗脫步驟，以及所有搖動(dòng)和磁性分離操作。

手工方法和 AAW? 方法的產(chǎn)量對(duì)比：同時(shí)展示了用于大腸桿菌表達(dá)的兩個(gè)構(gòu)建體，P0A710 和 P0A749。

更多親和純化磁珠：

內(nèi)容策劃：王丹琦

內(nèi)容審核：鐘可可

題圖來源：圖蟲創(chuàng)意