小鼠卵巢儲備衰退模型構建簡介

小鼠卵巢儲備衰退模型

前言

小鼠卵巢儲備衰退（Ovarian Reserve Decline, ORD）是指小鼠卵巢內原始卵泡、生長卵泡數量減少，卵母細胞質量下降，伴隨卵巢內分泌功能減退的病理生理過程，是生殖醫學、衰老研究及女性生殖健康相關機制研究的核心模型之一（小鼠是模擬人類卵巢早衰、衰老相關卵巢功能減退的經典模式生物）。

圖片來自網絡

01 構建方法

一、化學誘導模型

1. 環磷酰胺（CTX）聯合白消安（Bu）方案

機制：CTX 通過烷基化損傷 DNA，誘導原始卵泡提前激活并閉鎖；Bu 則直接破壞卵母細胞和顆粒細胞。

劑量與操作：

C57BL/6 小鼠：單次腹腔注射 CTX 120 mg/kg + 皮內注射 Bu 12 mg/kg，可顯著降低卵巢儲備（卵泡密度降至對照的 37%），同時保留部分生育力，適用于化療后殘留卵巢功能研究。

昆明鼠：腹腔注射 CTX 40 mg/kg 連續 5 天，可觀察到體重減輕、精子數量減少（雄性模型），提示雌性可能需調整劑量。

評估指標：卵巢組織學（原始 / 竇卵泡計數）、血清 AMH（抗繆勒管激素）降低、動情周期紊亂（動情期縮短或消失）。

優勢：操作簡便、周期短（2-4 周），可模擬醫源性卵巢損傷；殘留卵泡質量未受顯著影響，適合卵巢保護策略研究。

參考文獻-Study on the effects and mechanisms of Wenzhong Bushen Formula in improving ovarian reserve decline in mice based on network pharmacology

2. 雷公藤多苷（TWP）模型

機制：抑制顆粒細胞增殖和甾體激素合成，誘導卵泡閉鎖。

劑量：50 mg/kg 灌胃 14 天，可致卵巢指數降低、AMH 和雌激素水平下降，卵母細胞成熟率減少。

特點：副作用較少，但需長期給藥，適合研究慢性卵巢損傷。

二、自然衰老模型

1. 自然衰老

方法：飼養 C57BL/6 小鼠至 9-12 月齡（相當于人類圍絕經期）。

特征：卵巢纖維化加劇、免疫細胞浸潤（淋巴細胞比例增加 1 倍）、膠原酶（MMP2）表達下調導致膠原沉積。

優勢：接近人類生理衰老過程；缺點是周期長，個體差異大。

三、基因編輯模型

1. 關鍵基因敲除

miR-199b-5p 敲除：通過 CRISPR-Cas9 技術構建，表現為產仔數減少（平均每窩 6.43 vs 8.15 只），卵巢中 H12 基因表達升高，RS13 和 RL6 基因表達降低，提示 DNA 損傷修復和核糖體功能異常。

FoxO3a 卵巢特異性敲除：原始卵泡過度激活，導致儲備提前耗竭，模擬遺傳性卵巢早衰。

優勢：機制明確，可模擬遺傳性 DOR；缺點是技術門檻高，周期長（需 2-3 個月）。

2. 衰老相關基因干預

CD38 敲除：通過減少 NAD + 消耗，逆轉卵巢衰老相關的細胞通訊異常和纖維化，適用于抗衰老機制研究。

四、其他模型

1.半乳糖模型

機制：35% 半乳糖飲食誘導氧化應激，導致卵泡耗竭和卵巢纖維化。

評估：卵巢重量減輕、E2 降低、FSH 升高，輸卵管成熟卵母細胞數減少。

注意：需結合肝臟損傷評估（如肝組織 HE 染色），避免代謝副作用干擾。

插播一則限時活動！！

02 文獻分享

參考文獻：Study on the effects and mechanisms of Wenzhong Bushen Formula in improving ovarian reserve decline in mice based on network pharmacology

中文翻譯：基于網絡藥理學的溫中補腎方改善小鼠卵巢儲備衰退的作用及機制研究

期刊：《Journal of Ethnopharmacology》 ( IF 5.4/Q1 )

民族藥理學相關性：溫中止腎方（WZBSF）是一種傳統中藥經驗方，以益氣、健脾、溫腎、壯陽、活血、調經為主要功效。臨床證據表明，其通過改善卵巢儲備功能，在治療卵巢儲備功能減退（DOR）方面具有顯著療效。然而，溫中止腎方具體的藥理作用機制仍不明確。

研究目的：本研究旨在通過網絡藥理學和動物實驗，探究溫中止腎方改善卵巢儲備功能下降的作用機制。

材料與方法：采用超高效液相色譜-串聯質譜（UPLC-MS/MS）和氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用平臺對溫中止腎方進行分析。從中藥系統藥理學數據庫與分析平臺（TCMSP）獲取溫中止腎方的有效成分及靶點，并通過通用蛋白質資源數據庫（UniProt）進行標準化處理。從基因卡片數據庫（GeneCard）、在線人類孟德爾遺傳數據庫（OMIM）、藥物基因組學知識庫（PHARMGKB）和人類疾病基因數據庫（DisGeNET）收集疾病靶點，并對兩組靶點進行交叉比對。利用 cytoscape3.9.1 軟件和STRING數據庫構建蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）網絡，隨后通過Metascape數據庫進行京都基因與基因組百科全書（KEGG）和基因本體（GO）富集分析。最后，建立小鼠卵巢儲備功能下降模型，給予不同劑量的溫中止腎方，通過血清激素檢測、蘇木精-伊紅（H&E）染色、免疫熒光（IF）、免疫組織化學（IHC）及蛋白質印跡分析（WB）進行實驗驗證。

結果：溫中止腎方與卵巢儲備功能下降存在145個共同靶點。GO富集分析顯示，其涉及激素刺激反應、磷酸酶結合等生物學過程；KEGG分析表明，其與磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）信號通路、叉頭框蛋白O（FoxO）信號通路等相關。在卵巢儲備功能下降的小鼠中，溫中止腎方恢復了體重增長率，提高了卵巢指數，使動情周期恢復正常，逆轉了血清激素失衡，恢復了各類卵泡數量，并改善了卵巢形態。此外，溫中止腎方降低了磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）和磷酸化叉頭框蛋白O3a（p-FOXO3a）的水平，防止了原始卵泡的過度激活，維持了卵巢儲備功能。

結論：溫中止腎方可改善環磷酰胺和白消安誘導的卵巢儲備功能下降，其機制可能與抑制PI3K/AKT/FOXO3a信號通路有關。

實驗流程圖

1、網絡藥理學預測WZBSF治療DOR的潛在機制。

2、不同處理組小鼠給藥后的一般狀況。

3、不同組小鼠發情周期及血清激素水平的變化。

4、不同組的卵巢形態學和卵泡計數。

5、不同組的卵巢儲備狀態。

6、WZBSF通過PI3K/AKT/FOXO3a信號通路改善DOR小鼠卵巢功能。

7、本研究機制示意圖。

中醫藥基礎科研技術服務及加群交流：

相關咨詢，加微信：1278317307。

【福利時刻】科研服務（點擊查看）：、、、、、。咨詢加微信：1278317307。