《中草藥》基于中藥超分子探討黃芪-莪術配伍增效抗肝癌的科學內涵

原發性肝癌是全球范圍內發病率與致死率均居前列的惡性腫瘤[1]。中醫認為肝癌的核心病機為正氣虛損為本，痰濁凝滯、血瘀阻絡、癌毒內蘊為標[2]。其病理基礎為正氣虧虛與血瘀形成互為因果的惡性循環[2]。故對此類患者的治療應該以補氣益氣為主，輔以行血活血，以做到“祛瘀不傷正，扶正不留瘀”，因此臨床上益氣活血法被廣泛應用于肝癌的治療[3-5]。

黃芪味甘，微溫，無毒，歸脾、肺二經；是補氣類代表性中藥，具有補氣升陽、利水消腫、托毒生肌等功效[6]。莪術味辛、苦，性溫，入肝經，作為活血化瘀類中藥能大破氣中之血，故破血行氣為莪術之首要功效[7]。兩者配伍構成益氣活血的經典藥對。黃芪-莪術作為益氣活血的代表性藥對，最早見于《醫學衷中參西錄》中的理沖湯，具有補氣不壅中、攻破不傷正的特點[8]。竇永起教授指出，單用益氣藥雖能緩補正氣，但久用易致氣機壅滯，反不利于氣的運行；而活血藥雖能化瘀行滯，但長期使用易傷正氣；因此，氣血需協調并進，益氣與活血藥物合用不僅可互補不足，更能協同發揮破瘀不傷正、行氣不留瘀的療效[9]。在臨床實踐中，唐德才教授探索將黃芪-莪術藥對用于腫瘤治療，并據此擬定“芪術抗癌方”，其中黃芪與莪術配比為2∶1。他認為，莪術雖能破血行氣，但也易耗傷正氣；與黃芪合用則可增強破積消瘤之效，尤其適用于氣虛血瘀證型的腫瘤患者[10]。綜上，黃芪-莪術藥對在肝癌治療中療效確切，是抗肝癌中藥的重要組成。然而，其配伍協同的科學內涵尚不明確，亟需深入研究與闡釋。

目前，關于藥對配伍的研究多聚焦于體內外化學成分分析、藥動學分析、藥理作用機制和網絡藥理學研究等方面。黃芪-莪術配伍成分分析表明，黃芪中的皂苷類及黃酮類成分可顯著促進莪術脂溶性成分（如莪術二酮、吉馬酮）的溶出（含量升高2～3倍），提示二者配伍具有促進脂溶性成分溶出的作用[11]；同時也有研究表明，黃芪-莪術藥對可通過調節細胞周期蛋白依賴性激酶1（cyclin-dependent kinase 1，CDK1）、細胞周期蛋白B1（cyclin B1，CCNB1）等靶點及磷酸肌醇3-激酶-蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase-protein kinase B，PI3K-Akt）、腫瘤蛋白 p53（tumor protein p53，p53）等信號通路，形成多成分-多靶點-多通路的抗肝癌協同作用網絡[12]。上述研究方法雖在一定程度上揭示了黃芪-莪術配伍在特定層面的配伍科學內涵，但仍缺乏在物質基礎結構及功能協同層面的系統認識。因此需從更整體的角度出發，深入解析其配伍內涵及多層面協同作用機制。

近年來，一種更具整體性和結構性的中藥配伍研究思路逐漸受到關注。該思路基于“結構中藥學”理論，旨在通過研究中藥煎煮過程中形成的中藥超分子（supramolecules of traditional Chinese medicine，STCM），闡釋中藥配伍的科學內涵。已有研究發現在湯劑中存在由非共價鍵連接自組裝而成的STCM[13-17]。而結構中藥學認為結構與藥效相關，中藥在煎煮過程中，不僅存在成分的單純溶出，還存在成分間的相互作用，而成分間的相互作用會形成不同結構的STCM，并且其與藥效相關，因此推測STCM是湯劑發揮療效的重要物質基礎之一[18]。STCM的提出不僅豐富了中藥配伍理論的研究層次，也為揭示藥對配伍協同機制提供了新的研究視角和方向。

本研究以黃芪-莪術藥對為對象，通過離心-透析法對STCM進行分離；然后利用動態光散射（dynamic light scattering，DLS）技術結合透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）對煎煮過程中形成的STCM進行表征，利用光譜法對其形成機制進行分析；隨后利用液相色譜-質譜聯用（liquid chromatograph mass spectrometer，LC-MS）技術對STCM的成分進行分析；最后對黃芪-莪術超分子（AstragaliRadix-CurcumaeRhizomasupramolecules of traditional Chinese medicine，AC-STCM）的體外抗肝癌活性進行評價。

1儀器與材料

1.1儀器

EX125DZH型電子天平，美國Ohaus公司；F-4700型熒光分光光度計、Hitachi HT-7800型透射電子顯微鏡，日本日立公司；Frontier FT-IR型紅外光譜儀，美國Perkin Elmer公司；Scientz-10N/A型冷凍干燥機，寧波新芝生物科技股份有限公司；Milli-Q Direct型超純水機，美國Millipore公司；Zetasier Advance Series型粒度儀，英國Malvern公司；BB150型CO2細胞恒溫培養箱、Mul tiskan Sky High型全波長酶標儀、Ultimate 3000-Q-Exactive型超高效液相-四級桿-傅里葉變換質譜儀，美國Thermo Fisher Scientific公司；TDZ5-WS型多管架自動平衡離心機，湖南平凡科技有限公司。

1.2材料

黃芪（批號23021327）、莪術（批號22040108）均購自安徽協和成藥業飲片有限公司，經山東中醫藥大學藥學院趙東升教授鑒定，黃芪為豆科黃芪屬植物膜莢黃芪Astragalusmembranaceus (Fisch.) Bunge的干燥根，莪術為姜科姜黃屬植物蓬莪術Curcumaphaeocaulis Val.的干燥根莖。

光譜級溴化鉀（批號S30390）、透析袋（批號SP132594，截留相對分子質量3 500）均購自上海源葉生物科技有限公司；人肝癌HepG2細胞購自中國科學院上海細胞庫；DMEM高糖培養基（批號L100-500）、磷酸鹽緩沖液（PBS，批號L205-500）、胰蛋白酶（批號A300-100）均購自浙江百迪生物科技有限公司；二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO，GC203002-100 mL）購自武漢塞維爾生物科技有限公司；噻唑藍（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT，批號ST1537）購自上海碧云天生物技術有限公司。

2方法與結果

2.1STCM體系的發現與表征

2.1.1煎液（decoction，D）制備 稱取黃芪、莪術各60 g，分別裝入圓底燒瓶，加入600 mL超純水，浸泡30 min，沸騰后回流提取1 h，趁熱無紡紗布濾過，即得到黃芪單煎液（AstragaliRadix single decoction，A-D）和莪術單煎液（CurcumaeRhizoma single decoction，C-D），凍干保存。將上述A-D、C-D按照2∶1的比例，分別取各自單煎液的2/3和1/3液體混合均勻，即得黃芪-莪術物理混合液（Mix-D）。按照黃芪-莪術2∶1的比例，分別稱取黃芪40 g和莪術20 g，加入600 mL超純水，浸泡30 min，回流提取1 h，趁熱濾過，即得黃芪-莪術合煎液（AC-D）。所得樣品均通過冷凍干燥處理，得到其凍干粉末進行保存和后續實驗。

2.1.2統計方法 使用Graphpad Prism 9.5軟件進行數據統計與繪圖，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用Dunnett?t檢驗，測量值以
表示，P＜0.05表示具有顯著性差異。

2.1.3外觀顏色、丁達爾效應觀察及凍干粉得率測定 AC-D、Mix-D、A-D、C-D均表現出一定的顏色差異，其中，AC-D呈淺黃色，較Mix-D顏色更淡，提示在煎煮過程中可能存在成分溶出的差異（圖1-a）。此外，4種煎煮液均呈現出明顯的丁達爾效應，表明其中含有納米粒子，然而，其光路雖強但存在明顯散射現象，提示納米粒子分布可能不均勻（圖1-b）。將上述溶液凍干后得到的干粉，其顏色與原煎煮液顏色趨勢一致，且AC-D與Mix-D的凍干得率無顯著性差異，而Mix-D組的得率與A-D組和C-D組得率按比例相加所得結果基本一致（圖1-c和表1）。

為進一步驗證煎煮液中STCM的存在，對AC-D、Mix-D、A-D和C-D溶液的DLS結果及微觀形貌進行對比分析。

2.1.4DLS技術分析各煎液的粒徑及ζ電位 將煎液樣品轉移至比色皿中，在粒度儀的“Size”模式下測定樣品的粒徑和多分散指數（polydispersity index，PDI）；在粒度儀的“Zeta”模式下測定樣品ζ電位，平行3次，取平均值。結果顯示，AC-D粒徑較Mix-D粒徑小（圖2-a和表1），ζ電位值表現出更優越的穩定性，且分散更均勻（圖2-b和表1）；值得注意的是，Mix-D的粒徑、ζ電位等理化參數與兩單煎液按比例混合所得的理論值接近，提示在物理混合過程中可能未發生成分自組裝。

2.1.5各煎液樣品的TEM觀察 將1滴待測的液體樣品置于碳涂層銅網格上，室溫下靜置2～3 min以便顆粒吸附，用1%醋酸雙氧鈾溶液作為染劑，將銅網格置于室溫下自然干燥。待完全干燥后，將樣品置于TEM下進行觀察，并記錄其表面形貌及分布特征。結果發現，AC-D中存在不規則的類球形納米顆粒，Mix-D和A-D中存在大量不規絮狀聚集體，呈現出完全不同于AC-D的形貌；而C-D中也存在類球形納米顆粒（圖3），這提示C-D在形成納米粒子的過程中可能發揮重要作用。

以上結果表明，黃芪-莪術的合煎過程中并不是單純的成分溶出過程，其中也存在成分間的相互作用，最終形成了一種混懸的STCM聚集體。隨后，將上述4種煎液，以3 000 r/min（1 260×g）的轉速離心30 min，將上清液使用透析袋（截留相對分子質量3 500）進行透析處理，所得透析內液即為STCM[19-21]。

2.2STCM體系的表征

2.2.1STCM的提取 將黃芪、莪術按照2∶1的比例，各稱取40 g和20 g，加入600 mL超純水，浸泡30 min，回流提取1 h，趁熱濾過，得AC-D，將其以3 000 r/min（1 260×g）的轉速離心30 min，將上清液使用透析袋（截留相對分子質量3 500）進行透析處理，透析內液即為黃芪-莪術超分子（AC-STCM）。同理可得黃芪-莪術混合超分子（Mix-STCM），各樣品均凍干保存（操作同“2.1.1”項）。將Mix-STCM液體加熱至沸騰后回流1 h，所得產物即為Mix-hot組分。

2.2.2STCM外觀顏色和丁達爾效應表征及凍干粉得率測定 經離心-透析分離后，對獲得的4組STCM（AC-STCM、Mix-STCM、A-STCM、C-STCM）進行系統表征。結果顯示，4組溶液顏色較對應的煎液組（AC-D、Mix-D、A-D、C-D）均有所變淺，其中AC-STCM溶液呈淺黃色，較Mix-STCM顏色淺（圖4-a、5-a）；4組STCM溶液均呈現出明顯的丁達爾效應，表明體系中有納米粒子；但相比于煎液組，光散射程度有所減弱，提示這些樣品中的粒徑分布更加均一，這可能與離心過程中對大顆粒的去除有關（圖4-b、5-b）；進一步將4組STCM經過凍干處理后，對凍干粉理化性質進行分析，發現凍干粉的色澤趨勢與溶液狀態保持高度一致（圖4-c、5-c），并且其得率趨勢與煎液組結果相符（表2）；然而，所有STCM得率均顯著低于煎液組（表1、2），原因可能是在離心過程中除去了不溶性成分以及某些較大聚集體。

2.2.3DLS技術分析各STCM的粒徑及ζ電位 進一步對STCM的DLS結果進行對比分析。如圖6-a和表2所示，4組STCM的粒徑并無顯著性差異，可能由于各組樣品均經過相同的分離過程，導致其粒徑集中于相近的范圍內。然而，在電位測試中，AC-STCM與其余3組相比表現出顯著差異，提示其表面電荷不同（圖6-b和表2）。此外，各組的ζ電位和PDI趨勢與煎液組保持一致，其中AC-STCM的PDI值最低，表明其粒徑分布仍最為均勻（表3）。綜合以上結果可見，盡管各組STCM的粒徑大小相似，但其結構特征存在差異。尤其是合煎過程中生成的AC-STCM，其粒子表面電荷及分布均一性均顯示出獨特特征，提示不同配伍方式可導致形成具有差異性結構特征的STCM聚集體。

2.2.4各STCM樣品的TEM觀察 進一步通過TEM觀察4組STCM形貌，發現AC-STCM主要以300 nm左右的不規則球形存在，邊界清晰；而Mix-STCM則更多以A-STCM為主，以不規則、松散聚集的絮狀為主，形態差異明顯，這也說明在混合過程中未進一步組裝成新的STCM（圖7）。該結果與DLS分析結果高度一致，進一步證實合煎對STCM結構特征的調控作用。AC-STCM通過合煎誘導形成的有序STCM結構可能為其穩定性提升及藥效增強提供了結構基礎。

2.2.5各STCM樣品的熒光光譜法（fluorescence spectroscopy，FS）分析 為了進一步分析合煎是否發生自組裝，產生新的STCM，將待測液體樣品置于樣品池，打開儀器預熱30 min，激發波長設定為340 nm，在波長360～600 nm進行掃描，結果見圖8。在相同激發波長下，各組樣品的發射強度存在一定差異，其中AC-STCM與Mix-STCM之間的發射強度存在差異，提示物理混合過程中可能未發生有效自組裝，從而導致其結構存在不同。

2.2.6各STCM樣品的紅外光譜法（infrared spectroscopy，IR）分析 將“2.2.1”項中得到的凍干粉末用于該實驗。取各樣品凍干粉末與光譜級溴化鉀（KBr）混合研磨（分析NaOH干擾氫鍵時，樣品凍干粉與KBr和NaOH混合研磨），進行壓片后置于紅外光譜儀上扣除空氣背景后，設置掃描范圍4 000～400 cm?1，進行掃描，結果見圖9。AC-STCM在1 042 cm?1處的C-O伸縮振動出現明顯紅移，結合O-H的伸縮振動從3 377 cm?1向3 351 cm?1紅移了26 cm?1，提示C-O···H型氫鍵形成，從而佐證在自組裝過程中各種成分間存在氫鍵連接，這可能是AC-STCM結構穩定的主要非共價作用之一。此外，C-H的伸縮振動由2 930 cm?1向高波數移動至2 938 cm?1，表明可能存在疏水相互作用，使分子間堆積更為緊密，從而引起C-H鍵電子云分布的改變。苯環骨架振動由1 623 cm?1向低波數移動至1 616 cm?1，紅移7 cm?1，推測可能由于π-π堆積作用增強，使分子排列更緊湊，電子云密度降低，從而導致振動頻率下降。與此同時，根據AC-STCM的紅外特征吸收峰初步推測，其主要組成成分可能為黃芪多糖，由于其結構中存在大量羥基，這進一步支持氫鍵在合煎過程中參與了自組裝過程并形成了特定的STCM結構[22-24]。綜上，AC-STCM在紅外特征吸收峰的整體變化揭示了氫鍵、疏水作用與π-π堆積等非共價相互作用在其自組裝過程中的協同貢獻。

2.2.7紅外光譜驗證AC-STCM樣品中氫鍵破壞情況 考慮到已有文獻證實黃芪多糖可通過氫鍵與黃酮類化合物形成穩定的STCM[24]。結合本實驗中AC-STCM以黃芪多糖為主要成分的猜想，推測氫鍵在其自組裝過程中可能起到主導作用。為驗證該假設，通過添加NaOH破壞體系中的氫鍵，并采用紅外光譜對處理前后AC-STCM的變化進行分析，從而探究氫鍵對自組裝形成的影響[25-26]。結果（圖10）顯示，AC-NaOH樣品在3 000～3 700 cm?1的O-H伸縮振動吸收峰顯著減弱甚至消失，提示NaOH的堿性環境有效破壞了原體系中廣泛存在的氫鍵結構，進一步印證了AC-STCM很大程度上依賴于氫鍵的穩定維系。

2.2.8熒光光譜法驗證STCM樣品的熱驅動現象 通過TEM結果以及熒光光譜分析推測物理混合過程中未繼續進行有效的自組裝，所以隨后探究熱力學是否對STCM自組裝過程有驅動作用。對Mix-STCM樣品進行了加熱處理，并監測其熒光發射強度變化。結果顯示，加熱處理后，Mix-STCM的熒光強度呈現出向AC-STCM靠近的趨勢，提示其自組裝行為受熱力學調控。然而，盡管Mix-STCM加熱后有向AC-STCM靠近的趨勢，但Mix-STCM在加熱后其熒光特性仍無法與AC-STCM重合，表明其結構特征未能實現有效重構（圖11）。這可能是由于STCM的生成雖以熱力學驅動為主，但煎煮過程中關鍵成分的協同溶出行為及其在體系中的空間分布關系亦對其結構構建產生顯著影響。

2.2.9STCM穩定性評價 對STCM在7 d內的粒徑與ζ電位進行了監測，結果發現粒徑隨時間均呈現不同程度的增加，而ζ電位變化不明顯（圖12-a、b）。這一現象可能源于粒徑測試本質上反映的是“水合粒徑”，隨著時間推移，STCM表面暴露的功能基團逐漸通過非共價作用發生相互連接，從而在粒徑檢測中表現為表觀粒徑的增加。與此同時，電位未出現顯著波動，提示體系整體的表面電荷密度保持穩定，這仍能在一定程度上阻止劇烈聚集。值得注意的是，相較于Mix-STCM，AC-STCM的粒徑波動更大，可能是由于合煎過程中更多親水與疏水活性成分溶出并參與自組裝，使得體系結構更加復雜和動態，從而導致其在儲存過程中粒徑變化更為顯著。

綜上所述，成功從黃芪-莪術合煎液中分離獲得了STCM，并證實其在煎煮過程中可通過氫鍵和π-π堆積作用實現穩定的自組裝結構。該過程可能主要受熱力學驅動，但其形成亦與體系中的具體成分密切相關。因此，進一步分析STCM的化學組成，有助于揭示其形成的物質基礎與形成機制。

2.3AC-STCM和Mix-STCM成分分析

采用液相色譜質譜聯用儀（LC-MS）對AC-STCM和Mix-STCM進行成分分析。將樣品于超純水中超聲溶解，使用Thermo Ultimate 3000-Q-Exactive Focus對樣品進行分析，樣品在Hypersi Gold（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）色譜柱上進行分離，柱溫為40 ℃，流動相使用0.1%甲酸水溶液（A）、0.1%甲酸乙腈溶液（B），梯度洗脫：0～2.0 min，5% A；2.0～42.0 min，5%～95% A；42.0～47.0 min，95% A；47.0～47.1 min，95%～5% A；47.1～50.0 min，5% A；進樣量5 μL。質譜條件：ESI電噴霧離子源，正離子噴霧電壓3.5 kV，負離子噴霧電壓?3.2 kV，毛細管溫度320 ℃，二級碰撞能量20、40、60 eV，檢測模式為全MS-ddMS2，分別掃描正離子模式和負離子模式，掃描范圍為m/z 100～1 500，MS1分辨率設置為70 000，MS2分辨率設置為17 500。

對AC-STCM和Mix-STCM進行成分對比分析，結果（圖13-a～b和圖14）顯示，AC-STCM的主要成分包含毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、大豆皂苷和雙去甲氧基姜黃素等（表4）。與Mix-STCM進行比較后發現，AC-STCM中上述成分的含量均呈現不同程度的升高（圖15）。由于黃芪多糖的結構復雜，缺乏有效電離片段，在LC-MS中難以檢測，因此其未出現在上述譜圖中。然而，結合紅外光譜分析結果，AC-STCM中仍可觀察到典型的黃芪多糖特征吸收峰（圖9），間接證實其作為自組裝成分的存在。

值得注意的是，AC-STCM其穩定的STCM結構可能通過空間框架與分子間相互作用，促進活性成分的富集。即AC-STCM的構建過程或與成分的穩定富集存在相互促進關系。以上結果表明，在配伍合煎的過程形成的自組裝STCM起到了成分富集的作用，這可能是黃芪-莪術配伍發揮協同增效作用的重要機制之一。

2.4體外抗肝癌活性研究

2.4.1細胞毒性測試 本研究以HepG2肝癌細胞系為模型，為驗證AC-STCM是否為黃芪-莪術藥對協同增效的關鍵物質基礎，開展了細胞毒性實驗。將處于對數生長期的HepG2細胞均勻接種到96孔板中（5 000個細胞/孔），培養24 h后分別給予不同質量濃度（0、1、5、10、15、20 mg/mL）的AC-D、Mix-D、AC-STCM、Mix-STCM，對照組加入不含藥物的培養基，同時設置調零孔（不接種細胞），處理24 h，處理后每孔加入MTT溶液（終質量濃度為0.5 mg/mL），37℃孵育4 h；去上清，加入100 μL DMSO終止孵育，使用酶標儀測定570 nm處的吸光度（A）值，計算細胞存活率。

細胞存活率＝(A給藥－A調零)/(A對照－A調零)

結果（表5）顯示，無論是STCM組還是煎液組，配伍合煎液的抗腫瘤效果均優于對應的物理混合組，提示“藥對合煎配伍”在提升藥效方面具有重要作用；與AC-D相比，AC-STCM表現出更強的抗腫瘤活性。

2.4.2細胞結晶紫染色實驗 將HepG2細胞接種于6孔板中，使用完全培養基培養12 h，至細胞增殖到融合度達到90%時分別加入0、5、10、15、20、25mg/mL的含藥培養基繼續培養24 h，棄去含藥培基，多聚甲醛固定，結晶紫染色。結晶紫染色實驗結果（圖16）顯示，AC-STCM對HepG2細胞具有明顯的抑制作用，且呈質量濃度相關性。

2.4.3細胞劃痕愈合實驗和克隆形成實驗 將HepG2細胞接種于6孔板中，使用完全培養基培養12 h，至細胞融合度達到90%時，使用200 μL槍頭劃痕，用PBS清洗后替換成含0、0.5、1.0 mg/mL的含藥培養基，拍攝0、24、48、72 h時的圖像。獲得的圖像使用Image J軟件進行劃痕面積統計并計算劃痕遷移率。

細胞遷移率＝(S0－SN)/S0

S0為0 h時各組劃痕面積，SN為N h時各組劃痕面積（N＝24、48、72）

將HepG2細胞分別接種于6孔板中（每孔500個），待細胞貼壁后，分別加入0、0.5、1.0mg/mL的含藥培養基繼續培養14 d，期間每3天更換含藥培養基。培養結束時，棄去培養基，4%多聚甲醛固定后結晶紫染色，使用相機拍攝結晶紫染色結果。克隆形成實驗和劃痕實驗進一步表明，AC-STCM可有效抑制HepG2細胞的增殖與遷移能力（圖17-a、b和表6）。

綜上所述，黃芪-莪術配伍具有明顯的增效抗肝癌作用，且AC-STCM極可能是AC-D發揮抗肝癌活性的關鍵物質基礎。這一發現為中藥配伍的物質基礎研究提供了新的思路和證據。

3討論

隨著STCM化學的不斷發展，其與中醫藥的交叉融合日益深入。已有研究表明在多種中藥復方、藥對及單味藥煎煮液中存在由非共價鍵連接自組裝形成的STCM[27-30]。當前關于藥對配伍增效機制的研究主要集中于成分分析與作用機制探索，而STCM的提出為從整體層面解析中藥配伍規律提供了全新視角[27-30]。

中醫認為肝癌的核心病機為氣虛血瘀，黃芪-莪術作為“益氣活血”經典藥對，常用于肝癌的治療。本研究基于STCM化學理論，聚焦于黃芪-莪術合煎過程中成分間的相互作用是否能夠形成不同于物理混合產生的自組裝STCM。通過DLS與TEM橫向對比AC-STCM和Mix-STCM的差異，AC-STCM粒徑更小、分布更均勻且更加穩定。進一步通過FS和IR對STCM的形成機制進行分析，結果提示，黃芪-莪術在煎煮過程中會在熱力學的驅動下通過氫鍵等非共價鍵自組裝成不同于物理混合組的類球形STCM。已有研究表明黃芪-莪術合煎可以促進成分溶出，為探究STCM在其中的作用，本研究利用LC-MS對AC-STCM和Mix-STCM的化學成分進行比較分析，結果顯示AC-STCM中若干關鍵成分含量高于物理混合體系，該結果提示STCM的形成過程可能伴隨成分溶出的富集，這一協同效應或為配伍增效的重要物質基礎。進一步的體外實驗表明，黃芪-莪術合煎體系對HepG2細胞具有更顯著的抑制作用，驗證了STCM的形成與抗腫瘤活性提升之間存在密切關聯。此外黃芪中主要成分比如毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、芒柄花素、芒柄花苷等黃酮類成分由于結構中存在C6-C3-C6的苯環骨架，平面芳香結構利于π-π堆積，并且毛蕊異黃酮苷和芒柄花苷具有糖基，提供了氫鍵結合位點，所以這些黃酮及其苷類成分具有自組裝的潛力；莪術的主要成分比如姜黃素和雙去甲氧基姜黃素擁有長鏈共軛雙鍵結構和2個芳香環，其β-二酮結構利于氫鍵和金屬配位，同時能形成π-π堆積和氫鍵進行自組裝。綜上所述，根據成分的結構特征，黃芪與莪術的成分具備自組裝形成STCM的潛力，所以后續研究中將會從成分入手，進一步闡釋黃芪-莪術藥對在成分層面的配伍科學內涵。

本研究系統闡釋了“配伍合煎-超分子自組裝-協同增效”三者之間的內在關聯機制，不僅為黃芪-莪術藥對在抗肝癌中的配伍規律提供了理論支持，也為中藥復方“整體觀”的研究提供了STCM化學視角下的創新方法，為中藥藥對配伍增效的物質基礎與科學內涵研究提供理論與實驗基礎。但是不可否認本研究存在以下局限性，由于中藥湯劑中STCM的復雜性及動態變化特征，當前研究尚未能解析其精細結構，也未能明確活性成分在自組裝過程中是否存在特定的結構偏好性；此外，盡管通過LC-MS分析推測STCM的形成伴隨活性成分的富集，但尚未深入揭示該富集效應發生的具體機制；最后，本實驗的藥效驗證仍局限于體外細胞實驗并且并不能說明兩者配伍“破瘀不傷正、行氣不留瘀”的科學內涵，下一步將在動物模型等體內環境中開展更全面、精確的藥效評價研究，以進一步確認其生物學效應。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

參考文獻（略）

來 源：劉若雨，王祖馳，劉名玉，趙春芹，張 振，李 肖．基于中藥超分子探討黃芪-莪術配伍增效抗肝癌的科學內涵 [J]. 中草藥, 2026, 57(3):859-870.

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