四川大學(xué)重磅Cell！為肝纖維化治療迎來新突破！

肝纖維化是多種慢性肝病進展過程中的關(guān)鍵病理改變，尤其多見于代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎（MASH）。隨著纖維化的持續(xù)進展，患者可能發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重威脅生命健康。盡管近年來針對MASH的藥物研發(fā)取得了一定進展，但能夠有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化的治療手段仍然十分有限。因此，深入探究肝纖維化的分子機制，尋找可靠的治療靶點，已成為該領(lǐng)域亟待解決的科學(xué)問題。

2026年3月6日，四川大學(xué)丁楅(bi)森/曹中煒等聯(lián)合中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院王辰院士和北京泰德制藥公司等在《Cell》雜志發(fā)表了題為《Selective targeting of endothelial and perivascular angiocrine ROCK2 treats liver fibrosis》的研究論文。該研究首次揭示血管內(nèi)皮細胞和血管周肝星狀細胞中ROCK2的上調(diào)是驅(qū)動肝纖維化形成的關(guān)鍵機制，并成功開發(fā)了高選擇性的ROCK2抑制劑TDI01。

研究團隊首先通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，在人類纖維化肝臟中，“Rho GTPase cycle”信號通路顯著富集。進一步利用單細胞RNA測序技術(shù)精確定位，發(fā)現(xiàn)ROCK2在肝竇內(nèi)皮細胞和肝星狀細胞中表達特異性上調(diào)，且表達水平與纖維化分期呈正相關(guān)。相比之下，ROCK1在各細胞類型中呈普遍表達且無明顯變化。免疫熒光染色證實，ROCK2及其磷酸化形式主要定位于纖維化肝臟的LYVE1陽性的肝竇內(nèi)皮細胞和desmin陽性的血管周肝星狀細胞中。

為驗證ROCK2在肝纖維化中的致病作用，研究人員構(gòu)建了多種細胞特異性ROCK2基因敲除小鼠模型。在內(nèi)皮細胞特異性敲除ROCK2的小鼠中，CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化程度顯著減輕，血清ALT、AST水平及肝臟羥脯氨酸含量均明顯下降。肝星狀細胞特異性敲除ROCK2同樣可緩解肝纖維化，但效果弱于內(nèi)皮細胞敲除。而造血細胞或肝細胞中敲除ROCK2對肝纖維化無明顯改善作用。在MASH小鼠模型中，內(nèi)皮細胞或肝星狀細胞特異性敲除ROCK2同樣表現(xiàn)出顯著的抗纖維化效果。

基于上述發(fā)現(xiàn)，研究團隊通過計算機輔助藥物設(shè)計篩選了686個化合物，結(jié)合HTRF激酶活性篩選技術(shù)，最終獲得了高選擇性ROCK2抑制劑TDI01。該化合物對ROCK2的IC50為10.31 nM，對ROCK1的選擇性高達598倍。生物膜干涉實驗證實TDI01與ROCK2高親和力結(jié)合，而與ROCK1幾乎不結(jié)合。通過冷凍電鏡解析ROCK2-TDI01復(fù)合物結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，TDI01結(jié)合于ROCK2的ATP結(jié)合口袋，誘導(dǎo)激酶形成DFG-out的非活性構(gòu)象，其選擇性結(jié)合依賴于ROCK2第210位的亮氨酸殘基。

在MASH小型豬模型中，TDI01治療9個月后，動物肝臟硬度顯著降低，膠原沉積明顯減少，甚至優(yōu)于治療前水平。與THRβ激動劑resmetirom相比，TDI01表現(xiàn)出更強的抗纖維化效果。電鏡觀察顯示，TDI01治療可恢復(fù)MASH小型豬肝竇內(nèi)皮細胞的窗孔數(shù)量，改善肝竇毛細血管化。單細胞轉(zhuǎn)錄組分析表明，TDI01上調(diào)了與窗孔形成相關(guān)的基因（如NOS3、PPARG），下調(diào)了毛細血管化相關(guān)基因（如MMP2、COL1A1）。

進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)，TDI01可調(diào)控肝竇內(nèi)皮細胞的旁分泌功能。在纖維化肝臟中，內(nèi)皮細胞高表達促纖維化因子LGALS3（編碼Galectin-3），而TDI01治療可顯著抑制其表達。利用人精準(zhǔn)切割肝切片模型證實，外源性Galectin-3可促進膠原沉積和肝星狀細胞活化，而TDI01可阻斷這一過程，補充Galectin-3則部分逆轉(zhuǎn)了TDI01的抗纖維化效果。

在人體臨床試驗方面，TDI01的I期臨床試驗（ChiCTR2200058868）納入62名健康志愿者，結(jié)果顯示TDI01具有良好的藥代動力學(xué)特性和安全性，半衰期為8.8-12.8小時，口服生物利用度達56%。擴展臨床研究（ChiCTR2400082056）納入6名肝纖維化患者接受200 mg TDI01治療24周，5名患者肝臟硬度值進行性下降，多種無創(chuàng)肝纖維化評分指標(biāo)（S指數(shù)、GPR、FIB-4）顯著改善。治療前后肝穿刺活檢顯示，5名患者膠原沉積減少，METAVIR評分改善，且肝硬化患者表現(xiàn)出明顯的組織學(xué)改善。免疫組化證實TDI01可選擇性抑制肝臟ROCK2磷酸化，而對ROCK1無影響。治療期間未觀察到嚴(yán)重不良事件。

四川大學(xué)胡艷，楊彪，肖程聚，楊昕淳，張華，楊鵬博，杜瀟，張貴祥，吳東波，羅慶華及滕楊靜；中國解放軍總醫(yī)院梁蓓蓓，白楠，北京泰德制藥張道廣為本論文共同第一作者。本論文通訊作者為四川大學(xué)丁楅森，曹中煒，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和醫(yī)學(xué)院王辰院士，北京泰德制藥王紅軍，趙焰平，中國解放軍總醫(yī)院蔡蕓，和四川大學(xué)華西醫(yī)院易成。

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