流感黏膜佐劑研究進(jìn)展：守護(hù)呼吸道的免疫新力量

摘要：流感病毒的持續(xù)威脅讓疫苗研發(fā)不斷升級，傳統(tǒng)肌內(nèi)注射疫苗雖能誘導(dǎo)體液免疫，卻難以激活黏膜免疫這一呼吸道第一道防線。黏膜佐劑成為流感黏膜疫苗研發(fā)的核心，能突破黏膜屏障、增強(qiáng)抗原遞送與免疫激活。本文梳理了黏膜佐劑的作用機(jī)制、常見類型、臨床應(yīng)用現(xiàn)狀及面臨的挑戰(zhàn)，不同佐劑各有優(yōu)劣，未來多靶點(diǎn)協(xié)同設(shè)計(jì)與聯(lián)合應(yīng)用，或?qū)⒊蔀樾乱淮鞲幸呙绲年P(guān)鍵發(fā)展方向。

一、黏膜免疫：流感防控的第一道天然防線

人體的黏膜組織覆蓋面積達(dá)400㎡，呼吸道、消化道等黏膜是病原體入侵的主要入口，也是抵御流感病毒的第一道屏障。黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）中分布著巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DCs）、M細(xì)胞等免疫細(xì)胞，是黏膜免疫的核心陣地。其實(shí)，黏膜接種疫苗后，M細(xì)胞會率先攝取抗原并傳遞至淋巴組織，激活B細(xì)胞分化為分泌sIgA的漿細(xì)胞，sIgA能直接在黏膜部位阻斷病毒黏附，這是肌內(nèi)注射疫苗難以實(shí)現(xiàn)的效果。黏膜免疫還能同時誘發(fā)局部黏膜和全身系統(tǒng)免疫反應(yīng)，這種雙重保護(hù)，對呼吸道傳播的流感病毒而言，防護(hù)效果會更直接。

圖1 佐劑促進(jìn)抗體產(chǎn)生

二、黏膜佐劑的核心作用：打破屏障，激活免疫

黏膜自身存在免疫耐受特性，抗原很難直接穿透黏膜屏障并激活免疫反應(yīng)，黏膜佐劑就是解決這一問題的關(guān)鍵。這類物質(zhì)作為疫苗添加劑，能分為遞送系統(tǒng)和免疫刺激劑兩類，核心作用是提升抗原遞送效率，打破黏膜耐受，增強(qiáng)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時間。黏膜佐劑會靶向抗原呈遞細(xì)胞（APCs），調(diào)控Th1或Th2免疫通路，還能延長抗原釋放時間，讓免疫細(xì)胞有更充足的時間識別和響應(yīng)抗原。簡單說，沒有合適的黏膜佐劑，流感黏膜疫苗就很難實(shí)現(xiàn)高效的免疫保護(hù)，這也是佐劑成為研發(fā)核心的原因。

圖2 黏膜佐劑相關(guān)TLR/STING/IL信號通路

三、流感疫苗常用黏膜佐劑：各有特色，各存挑戰(zhàn)

目前應(yīng)用于流感疫苗的黏膜佐劑類型多樣，不同佐劑的作用方式、效果和局限性都很明顯，實(shí)際研發(fā)中需根據(jù)需求選擇。抗原偶聯(lián)佐劑如轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf），能靶向遞送抗原、提升免疫效率，但耦合過程復(fù)雜，還存在安全風(fēng)險。CpG-ODN佐劑技術(shù)成熟、成本可控，能激活TLR9通路促進(jìn)DC成熟，卻可能在高劑量下引發(fā)過度炎癥，且存在物種差異。顆粒狀載體如殼聚糖納米粒、脂質(zhì)體，生物相容性好、能精準(zhǔn)遞送抗原，不過部分載體制備工藝復(fù)雜，批次差異較明顯。

表1 流感疫苗用黏膜佐劑

佐劑

流感毒株

疫苗組合

效果

Advax

A/turkey/Turkey/1/2005 (H5N1)

WIV +Advax

增強(qiáng)免疫并提供保護(hù)

APG、結(jié)冷膠、殼聚糖

A/PR/8/34 (H1N1)等

裂解流感疫苗-APG/結(jié)冷膠/CS

APG為潛在黏膜佐劑，抗病毒

CpG-ODN

A/duck/NanJing/01/1999 (H9N2)

H9N2 WIV +CpG

誘導(dǎo)局部黏膜和全身免疫，促進(jìn)DC成熟

殼聚糖納米粒

A/Brisbane/59/2007 (H1N1)

CS/TPP-HA

誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，提升抗體水平，降低發(fā)病率

脂質(zhì)體(Fos47)

A/California/04/2009 (H1N1)pdm09

IIAV+ Fos47

激活肺組織記憶T細(xì)胞，誘發(fā)全身免疫

表2 流感黏膜佐劑平臺的特點(diǎn)與展望

佐劑平臺

優(yōu)勢

劣勢與挑戰(zhàn)

展望

抗原偶聯(lián)佐劑

增強(qiáng)抗原呈遞，靶向遞送，提升免疫效率

耦合工藝復(fù)雜，存在使用安全風(fēng)險，增加疫苗研發(fā)難度

開發(fā)可生物降解的偶聯(lián)載體，降低臨床長期毒性風(fēng)險

細(xì)菌樣顆粒（BLPs）

免疫激活效率高，安全性較好，適用于多價疫苗設(shè)計(jì)

需大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證效價與安全性，免疫原性難控制

CpG-ODN

增強(qiáng)免疫激活，適配多種疫苗，工藝成熟，成本可控

高劑量引發(fā)過度炎癥，臨床研究存在物種差異，遞送效率待提升

需長期關(guān)注安全性，開展多疫苗臨床實(shí)驗(yàn)

脂質(zhì)體納米粒

可修飾抗體/配體實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)遞送，生物可降解

長期儲存易聚集，穩(wěn)定性需優(yōu)化

結(jié)合外泌體與雜化納米粒，提升穩(wěn)定性和靶向性

病毒樣顆粒（VLPs）

免疫原性高，安全性好，可修飾

產(chǎn)量低，成本較高，遞送效率不足

優(yōu)化生產(chǎn)成本，探索多靶點(diǎn)協(xié)同效應(yīng)

除了單一佐劑，聯(lián)合佐劑的研發(fā)也成為趨勢。比如油包水納米乳劑與RIG-I激動劑聯(lián)用，能平衡Th1/Th2/Th17免疫反應(yīng)，增強(qiáng)抗病毒細(xì)胞免疫；白介素-2與殼聚糖聯(lián)用作為H7N9流感疫苗佐劑，誘導(dǎo)的IgG和sIgA水平遠(yuǎn)高于肌內(nèi)注射組。坦白講，聯(lián)合佐劑能同時激活多個模式識別受體，更貼近人體天然的免疫反應(yīng)模式，防護(hù)效果會更全面。

四、黏膜佐劑的臨床轉(zhuǎn)化：曙光初現(xiàn)，仍有阻礙

黏膜佐劑的研究最終要落地臨床，目前已有多款佐劑進(jìn)入流感或新冠疫苗的臨床實(shí)驗(yàn)階段，初步結(jié)果展現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景。Advax-CpG佐劑聯(lián)合流感/新冠疫苗經(jīng)口服或舌下接種，在I期臨床中表現(xiàn)出良好的安全性和耐受性，能有效抵御奧密克戎和流感病毒。GEM顆粒佐劑的鼻噴流感疫苗，I期臨床顯示能誘導(dǎo)更高的血凝抑制（HI）滴度，且安全性良好。W805EC納米乳佐劑鼻噴接種后，能同時誘導(dǎo)全身和黏膜免疫，在健康成人中耐受性佳。

表3 流感和新冠疫苗中進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)的黏膜佐劑

佐劑名稱

適用疫苗

描述

臨床階段

NCT編號

Advax-CpG

流感、COVID-19

安全且耐受性好，對奧密克戎BA.5和流感病毒有強(qiáng)保護(hù)力

I期

NCT06355232

鞭毛蛋白

COVID-19

評估人體中的安全性、免疫原性和耐受性

早期I期

NCT06768697

GEM顆粒

流感

安全且耐受性好，誘導(dǎo)更高的HI滴度

I期

未知

PICLC

COVID-19

安全，黏膜免疫原性中等

I/Ib期

NCT04672291

W805EC

流感

安全且耐受性好，提升抗原特異性IgA水平

I期

NCT01333462

但臨床轉(zhuǎn)化的路上，還有不少難題需要攻克。部分黏膜佐劑的黏膜免疫效果偏弱，比如PICLC佐劑雖安全，卻需要進(jìn)一步增強(qiáng)黏膜防護(hù)能力。同時，佐劑的全身毒性、成本效益比，以及不同人群的適配性，都需要長期、全面的監(jiān)測。而且，黏膜佐劑的個性化配方和靶向遞送技術(shù)，目前還處于探索階段，尚未形成成熟的應(yīng)用體系。

五、未來方向：解鎖黏膜佐劑的更多可能性

目前流感黏膜佐劑的研發(fā)，還存在一個關(guān)鍵問題：部分佐劑的作用機(jī)制尚未完全闡明，這直接影響了佐劑的設(shè)計(jì)和優(yōu)化。我更愿意相信，未來的研究會更深入探索黏膜免疫系統(tǒng)與佐劑的相互作用，厘清佐劑的精準(zhǔn)作用靶點(diǎn)和信號通路，這是研發(fā)更高效佐劑的基礎(chǔ)。多靶點(diǎn)協(xié)同設(shè)計(jì)和聯(lián)合佐劑應(yīng)用，會成為主流方向，不同佐劑取長補(bǔ)短，能實(shí)現(xiàn)更均衡的免疫反應(yīng)。同時，生物可降解、低毒性、高靶向性的佐劑載體，會成為研發(fā)重點(diǎn)，比如殼聚糖衍生物、無機(jī)納米佐劑的優(yōu)化，能提升佐劑的安全性和遞送效率?；蚓庉?、合成生物學(xué)等新技術(shù)的融入，也會為黏膜佐劑的研發(fā)提供新的思路和方法，推動新一代流感黏膜疫苗的誕生。

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